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實驗室危險物質(zhì)及處理方法--EBEBEthidium bromide,溴化乙錠

時間:2015年12月22日 信息來源:湘智離心機 字體: 打印此頁

溴化乙錠是一種高度靈活的熒光染色劑,用于察看瓊脂糖和聚丙烯酰胺凝膠中的DNA。溴化乙錠用規(guī)范302nm 紫外光透射儀激起并放射出橙紅色信號,察看瓊脂糖凝膠中DNA最常用的辦法是應(yīng)用熒光染料溴化乙錠停止染色,溴化乙錠含有一個能夠嵌入DNA堆積堿基之間的一個三環(huán)平面基團。它與DNA的分離簡直沒有堿基序列特異性。在高離子強度的飽和溶液中,大約每2.5個堿基插入一個溴化乙錠分子。當(dāng)染料分子插入后,其平面基團與螺旋的軸線垂直并經(jīng)過范德華力與上下堿基互相作用。這個基團的固定位置及其與堿基的親密接近,招致與DNA分離的染料呈現(xiàn)熒光,其熒光產(chǎn)率比游離溶液中染料有所增加。DNA吸收254nm處的紫外輻射并傳送給染料,而被分離的染料自身吸收302nm和366nm的光輻射。這兩種狀況下,被吸收的能量在可見光譜紅橙區(qū)的590nm處重新發(fā)射出來。由于溴化乙錠-DNA復(fù)合物的熒光產(chǎn)率比沒有分離DNA的染料高出20-30倍,所以當(dāng)凝膠中含有游離的溴化乙錠(0.5ug/ml)時,能夠檢測到少至10ng的NDA條帶。溴化乙錠能夠嵌入堿基分子中,招致錯配。溴化乙錠是強誘變劑,具有高致癌性!會在60-70度是蒸發(fā)(所以最好不要在膠太熱的時分加,或者應(yīng)該加到液體里,0.5ug/ml,染色半小時)(當(dāng)EB加得過多時,也能夠在室溫用水將已染色的凝膠浸泡20min以降低未分離的EB惹起的背景熒光)。
    溴化乙錠溶液的凈化處置:由于溴化乙錠具有一定的毒性,實驗完畢后,應(yīng)對含EB的溶液停止凈化處置再行棄置,以防止污染環(huán)境和危害人體安康。

(1) 關(guān)于EB含量大于0.5mg/ml的溶液,可如下處置:
①將EB溶液用水稀釋至濃度低于0.5mg/ml;
②參加一倍體積的0.5mol/L KMnO4,混勻,再參加等量的25mol/L HCl,混勻,置室溫數(shù)小時;
③參加一倍體積的2.5mol/L NaOH,混勻并廢棄。

(2)EB含量小于0.5mg/ml的溶液可如下處置:
① 按1mg/ml的量參加活性炭,不時輕搖混勻,室溫放置1小時;
② 用濾紙過濾并將活性碳與濾紙密封后丟棄



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